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应用资料

细胞计数——测量微球中的细胞数量


共聚焦观察与细胞成像分析系统相结合,让用户能够计算横截面微球图像中的细胞数。

目的

了解细胞数量是使用细胞进行分析的最重要参数之一,在微球分析中也是如此。用血细胞计数器进行细胞计数需要使用通过用胰蛋白酶溶解微球制备的细胞悬液。但这样做的情况下,源自其3D结构的微球特征将会丢失。在本研究中,对微球进行非破坏性细胞计数的方法如下:通过共聚焦观察并结合细胞分析系统测量微球横截面图像中的细胞数。将结果与使用血细胞计数器获得的结果进行比较。

Objectives

样品的制备

HeLa或HT-29的细胞悬液以500个细胞/孔的密度种入96U孔板(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD)中。在细胞培养开始后48小时收获所有微球。将每个微球的一半固定在4%的福尔马林中,然后用Hoechst 33342染色并隔夜进行透明化。将每个微球的其余部分用胰蛋白酶过夜处理,以制备细胞悬液。

1)Susaki等人细胞杂志2014年4月24日;157(3):726-39. doi: 10.1016/j.cell.2014.03.042.EPUB 2014年4月17日。

结论
利用细胞分析系统和血细胞计数器进行细胞计数

使用该系统获得了上述微球的荧光图像。(如: 405 nm, Em: 488 nm)。为了计数细胞,系统每20μm采集一个微球的横截面图像,然后识别并计数可见细胞(图1)。接下来,将核的数量相加,以此估计整个微球中的细胞总数(系统计数)。将结果与使用血细胞计数器(手动计数)获得的结果进行比较,如图2所示(条形图:SD, n=6).这些结果表明,该系统不但能够对微球进行细胞计数,还可保持其结构完整性,而不必使用胰蛋白酶溶解微球。

Conclusion

PrimeSurface为Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.的注册商标。
Olympus为注册商标,NoviSight和Insightful Analysis、Intelligent Answers均为Olympus Corporation的商标。

Products used for this application

3D细胞分析软件

NoviSight

  • 从完整结构到亚细胞级别的3D图像识别
  • 统计分析
  • 多种默认检测方法

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