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应用资料

对药物的反应-3D细胞培养的内部和外部


通过细胞成像评估药物对3D细胞培养的影响。
研究了药物对3D细胞培养物(如微球)内部和外部影响的差异。

目的

诸如微球的3D细胞培养近期被用于研究细胞对药物的反应。但是,3D细胞培养物内部和外部的响应差异尚未经过考虑。本研究中利用共聚焦显微镜观察微球深层研究这一差异。

目的

样品的制备

Fucci是一种采用双色方案的细胞周期指示剂。将由表达Fucci的转基因HT-29细胞组成的微球暴露于10 nM的顺铂中。孵育96小时后,从细胞培养物中除去含有顺铂的培养基,将其固定在4%福尔马林中,并用透明化试剂处理。

结论
荧光图像的采集和分析

在从表面到深度150μm的范围内每5μm厚度对微球的共聚焦荧光图像进行一次采集。使用分析软件分析每层中红色(G0和G1相)与绿色(S、G2和M相)的比率。在没有顺铂的情况下,内部和外部之间的红色/绿色比率没有显著差异(图1)。存在浓度10 nM的顺铂情况下下,红色/绿色比率随与表面距离的增加而增加(图2和3)。

图1:在没有顺铂的情况下,微球细胞周期的深度依赖性变化 图2: 存在浓度10nM顺铂情况下,微球细胞周期的深度依赖性变化  图3:使用浓度10nM顺铂处理的微球图像

Olympus为注册商标,NoviSight和Insightful Analysis、Intelligent Answers均为Olympus Corporation的商标。

Products used for this application

3D细胞分析软件

NoviSight

  • 从完整结构到亚细胞级别的3D图像识别
  • 统计分析
  • 多种默认检测方法

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