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活细胞荧光成像的6个技巧

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活细胞荧光成像

由于您需要在不影响细胞活力的情况下获得高质量的图像,那么活细胞荧光成像可能就很棘手。尽管如此,只要选用正确的显微镜工具和技术,您就可以成功进行实验并获得可靠的图像数据。

这里介绍一下获得良好活细胞荧光成像的六个技巧。

1.选用适合您成像需求的显微镜。

在涉及到活细胞成像的情况下,并非所有显微镜都没有分别。比如说,倒置显微镜由于从样品下方成像,因此活细胞成像效果很好。这样可以让物镜能够更靠近活体标本,而这对于大多数高数值孔径(NA)物镜来说是必需的要求。

2.使用盖玻片底部培养皿。

塑料底部培养皿会导致自发荧光并降低信噪比(S/N)。由于这些原因,在活细胞荧光成像实验期间尽可能使用盖玻片底部培养皿非常重要。

3.使用透射率较高的荧光滤光片提高信噪比。

荧光滤光片镜组及其内部的滤光片是活细胞荧光成像实验最重要的硬件之一。

选用具有高透射率的滤光片就可以收集尽可能多的荧光信号。这样可以缩短曝光时间,从而减少光漂白和光毒性。奥林巴斯滤光片镜组包含的特殊涂层还可减少镜组内的杂散光并提高最终成像的信噪比。

荧光滤光片镜组

奥林巴斯滤光片镜组

4.使用高数值孔径物镜收集更多光信号并缩短曝光时间。

使用具有较高数值孔径的物镜是缩短曝光时间的另一种好方法。在相同放大倍率下,这类物镜将比较低数值孔径物镜收集更多的光信号。这将有助于进一步缩减曝光时间,从而在长时间活细胞荧光实验中改善细胞健康状况。

奥林巴斯物镜

奥林巴斯X Line 40X油浸物镜

5.根据您的实验需求优化培养模型。

当今市场上的显微镜培养箱种类繁多。无论使用载物台上的培养箱还是全包裹显微镜的培养箱,务必确保培养箱能够满足活细胞的所有需求,包括提供湿度和适当气体浓度的能力。

某些培养箱甚至带有可防止室内光线进入显微镜的遮光板,从而有助于提高信噪比。

6.使用锁焦设备减少达到正确对焦位置所需的Z轴帧数。

由于活体样本会四处移动,因此务必确保在延时实验期间可以正确捕获焦平面图像。

不要通过Z轴序列在每个时间点将样品多次暴露在激发光照明下,而是要使用可在延时实验中保持聚焦的漂移补偿设备(如我们的TruFocus Z轴漂移补偿模块)

TruFocus Z轴漂移补偿设备

奥林巴斯TruFocus Z轴漂移补偿设备

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生命科学显微镜产品经理

Lauren Alvarenga是奥林巴斯美洲公司科学解决方案部门研究成像的产品经理。她目前负责成像软件以及倒置和超分辨率显微镜。她拥有罗彻斯特理工学院的生物医学摄影通信理学学士学位。

2020年2月18日
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